科研血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。景源實驗技術介紹一下在科研血清實驗中常見的一些問題。
1、如何貯存和凍結血清才不會使產品質量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但有必要注意的是,融解過程中有必要規矩地搖晃均勻。長時刻貯存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而構成沉積或可見的混濁。因而,推薦在-20℃以下貯存血清,并防止反復凍融。主張血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,主張無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
2、血清中包含絮狀沉積,它們是什么,怎樣處理?
這些沉積包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產品性質。要除掉沉積,離心血清(400g,1-2分鐘)或許簡單的讓其沉積在瓶子底部,將血清小心地轉移到另一個無菌瓶里(一般不主張選用過濾的辦法除掉沉積,由于沉積會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉積并加熱至37℃就會再溶解。所以,運用產品時要搖動并加熱血清至37℃,沉積會天然消失。
3、如何防止血清中發作沉積?
按如下操作可防止沉積的發作:
(1)凍結血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,削減沉積的發作。
(2)血清分裝凍存時,須規矩搖晃均勻(當心勿形成氣泡),使溫度與成分均一。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃凍結,因溫度改變太大,簡單形成蛋白質凝結而發作沉積。
(4)勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得污濁,一起血清中許多較不穩定的成份也會因而受到破壞,從而影響血清的品質。
(5)若有必要做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時刻過久或搖晃不均勻,都會形成沉積物的增多。
在ELISA實驗的過程中,血清培養是很重要的步驟,但是在這過程中也會出現一些的問題,比如說,在培養進程中會出現一個個“小黑點"的現象,這是怎樣一回事呢?接下來就為大家解析一下這個現象出現的原因以及解決方法。
我們一旦發現培養基中有黑點,我們先不要著急,也不要慌張,要搞清楚這個黑點是什么?什么構成的?首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀況,黑點是否游動等。如果細胞被污染,微生物則會不斷繁衍,培養基就會敏捷變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀況出色,與黑點出現前比較,沒有任何改變,那么,黑點的出現或許與以下幾種狀況有關:
第一,細胞生長過老,黑點是破碎的細胞殘骸
第二,血清質量欠好,重復凍融的效果
第三,制作培養基的pH值偏高,不宜細胞生長
第四,制作培養基的水質、容器不合格(可應用離心、過濾的方法去除這些黑點)
第五,培養的原代細胞中出現小黑點(或許是原代組織中的雜質,屢次傳代能夠消除)。
那么我們怎樣防止黑點生成呢?一般要做到以下幾點:
(1)盡可能減少血清凍融次數。
(2)培養基無需37℃水浴。
(3)培養基保持PH值7.0- 7.2。
(4)嚴格控制制作培養基的水質,容器定時沖刷。
(5)掌握細胞傳代的機會,細胞切勿生長過老。